NEB內(nèi)切酶已經(jīng)成為分子生物學(xué)研究*的工具之一，在分子克隆、基因分型、遺傳突變研究和測(cè)序等等方面應(yīng)用廣泛，是一種高保真熱穩(wěn)定型連接酶，由 DNA 連接酶和試劑混合而成。該酶能高保真且連接 DNA 切刻位點(diǎn)，其保真性沒(méi)有任何酶能與之相比。在優(yōu)化的緩沖液體系中，該酶將具有5´-磷酸基和3´-羥基的切刻位點(diǎn)以磷酸二酯鍵進(jìn)行連接，極大程度降低了錯(cuò)配率。改良的配方使得該產(chǎn)品可以更好的識(shí)別連接反應(yīng)供體和受體，從而可以檢測(cè) SNPs 和其他等位基因變異。
NEB內(nèi)切酶反應(yīng)條件：
1、1X T4 DNA 連接酶反應(yīng)緩沖液
2、[50 mM Tris-HCl（pH 7.5 @ 25℃），10 mM MgCl2，10 mM DTT，1 mM ATP]。推薦 DNA 5? 末端濃度為 0.1-1.0 μM，16℃ 溫育。
3、熱失活：65℃ 10 分鐘。
NEB內(nèi)切酶注意事項(xiàng)：
1、與 E. coli DNA 連接酶需要 NAD+ 作輔因子不同，T4 DNA 連接酶的輔因子是 ATP。
2、稀釋后的 T4 DNA 連接酶應(yīng)于 -20℃、50% 甘油貯存緩沖液（稀釋緩沖液 A，NEB #B8001）中保存。如稀釋后馬上使用，也可用 1X T4 DNA 連接酶反應(yīng)緩沖液稀釋。
3、只要在反應(yīng)體系中補(bǔ)加 1 mM ATP，連接反應(yīng)就可以在 NEB 提供的四種限制性內(nèi)切酶緩沖液或在T4 DNA 多聚核苷酸激酶反應(yīng)緩沖液中進(jìn)行。
對(duì)于供應(yīng)商而言，NEB內(nèi)切酶供應(yīng)是一個(gè)相對(duì)而言穩(wěn)定有利的市場(chǎng)，這是因?yàn)樗璧难邪l(fā)以及工藝過(guò)程的經(jīng)費(fèi)較少，而且這個(gè)*每一個(gè)百分點(diǎn)的漲落都會(huì)帶來(lái)意料不到的收益。
